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HYP是机体胶原蛋白主要成分之一，胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等，因此HYP含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。

样品经水解产生游离的HYP，进一步被氯胺T氧化，氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应，产生红色化合物，在560nm处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm吸光值，可计算HYP含量。

• 吸光值大于0.8，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。
  
• 试剂有一定的毒性，请操作时做好防护措施，防止吸入或与皮肤接触。
  
• 最低检出限为3.8mg/L。

• 组织样本：称取约0.2g样品于玻璃管，加入2mL的组织提取液，置于110℃烘箱，水解6至12小时，用提取液定容至2mL，12000g，25℃，离心20min，取上清待测。
  
• 细胞样本：取约500万个细胞，加入1mL的细胞提取液，于高压消毒器中15磅保持30min，自然降压后待测。
  
• 血清样本：取0.1mL血清，加入0.5mL无水乙醇使蛋白质沉淀，8000g 4℃离心5min。将上清倒入另一个EP管，氮吹或沸水浴将乙醇挥发干。冷却后再加入
• 2mL50%异丙醇，充分溶解混匀待测。

• 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至560nm，蒸馏水调零。
  
• 按下表加入各成分：
  

  成分(μL)	对照管	测定管
  样本	-	60
  试剂一	60	60
  混匀，室温静置20min。
  试剂二	60	60
  水	180	120

  
  
• 混匀，60℃，20min，取出后25℃静置15min，取200μL于微量石英比色皿/96孔板中检测560nm处吸光值。ΔA=A测定-A对照。

• 用微量石英比色皿测定
  
  标准曲线：y=64.875x+ 0.0251，R²=0.9991
  
  
  • 按样品重量计算
    组织羟脯氨酸含量(mg/g鲜重)=(ΔA-0.0251)÷64.875×V_反总÷(V_样÷V样总×W) = 0.154×(ΔA-0.0251)÷W
    
  • 按细菌或细胞密度计算
    细胞羟脯氨酸含量(mg/10⁴cell)=(ΔA-0.0251)÷64.875×V_反总÷V_样×V_样总÷细胞数量(万个)= 0.077×(ΔA-0.0251)÷细胞数量(万个)
    
  • 按血清体积计算
    HYP含量(mg/mL)=(ΔA-0.0251)÷64.875×V_反总÷V_样×2 =0.154×(ΔA-0.0251)
    V_反总：反应总体积，0.3mL；
    V_样：反应中样品体积，0.06mL；
    V_样总：加入提取液体积，mL；
    W：样本重量，g
• 用96孔板测定
  
  标准曲线：y=32.4375x+ 0.0251，R²=0.9991
  
  
  • 按样品重量计算
    HYP含量(mg/g鲜重)=(ΔA-0.0251)÷32.4375×V_反总÷(V_样÷V_样总×W) = 0.308×(ΔA-0.0251)÷W
    
  • 按细菌或细胞密度计算
    HYP含量(mg/10⁴cell)=(ΔA-0.0251)÷32.4375×V_反总÷V_样×V_样总÷细胞数量(万个)= 0.154×(ΔA-0.0251)÷细胞数量(万个)
    
  • 按血清体积计算
    HYP含量(mg/mL)=(ΔA-0.0251)÷32.4375×V_反总÷V_样×2 = 0.308×(ΔA-0.0251)
    V_反总：反应总体积，0.3mL；
    V_样：反应中样品体积，0.06mL；
    V_样总：加入提取液体积，mL；
    W：样本重量，g；
    2：血清吹干后复溶的倍数。